Redescubriendo las variedades minoritarias de Baleares: el estado sanitario, un reto en su recuperación

La reducción de la diversidad de la vid debida a diversos factores (aparición de Phylloxera vastatrix a finales del siglo XIX, globalización del mundo del vino, delimitación de cultivares por parte de DOs, etc), ha sido más pronunciada en zonas aisladas como las Islas Baleares, donde, a pesar de su pequeña extensión geográfica, la diversidad de la vid en la historia se considera muy alta [1]. Los vinos baleares eran mundialmente conocidos por su alta calidad desde la época romana y en las últimas décadas, varios estudios han demostrado la alta aptitud enológica de algunos cultivares minoritarios de estas islas [2]. La viticultura es actualmente uno de los sectores agrícolas más dinámicos en las Islas Baleares. Las perspectivas de futuro para el sector son muy positivas, ya que el mercado interno tiene capacidad para absorber más producto, y a este mercado se le puede sumar el relacionado con el turismo de calidad y la exportación.

En las Islas Baleares existen dos denominaciones de origen, DO Binissalem y DO Pla i Llevant, y seis vinos de la tierra (VT Illes Balears, VT de Eivissa, VT de Menorca, VT Serra de Tramuntana-Costa Nord, VT de Formentera y VT de Mallorca). Aunque las variedades locales Manto negro y Callet como tintas y la blanca 'Moll o Premsal Blanc' siguen siendo las más cultivadas, el sector está muy interesado en la autorización de nuevas variedades locales. En los últimos años se han ido incorporando nuevas variedades minoritarias (Gorgollassa, Giró ros, Escursac, Esperó de gall, Callet negrella, y Mancès de Tibús) en la categoría de variedades de uva de vinificación autorizadas en las Illes Balears. Además, los consejos reguladores cada vez están más abiertos a incorporar en sus reglamentos variedades minoritarias, con el objetivo de aportar diversidad a su producción vitícola manteniendo su identidad y diferenciación.

El conocer su estado sanitario ha sido crucial para la recuperación de estas variedades, ya que es imperativo, además de su identificación y caracterización, que el material esté libre de virus. Por tanto, la conservación de variedades minoritarias y su posible utilización con posterioridad, requiere disponer de material sano.

Un estudio reciente publicado en la revista Plants [3] ha puesto de manifiesto que los principales virus que afectan la vid están presentes en las variedades minoritarias y mayoritarias, siendo la incidencia de las diferentes infecciones víricas muy elevada. Estos resultados han servido para conocer el estado real del material vegetal disponible en Baleares y poder así detectar aquellas cepas que puedan estar sanas o bien determinar para qué variedades debe recurrirse al saneamiento.

Material vegetal

El estudio se llevó a cabo en 315 plantas de 33 variedades (Tabla 1), procedentes del Banco de Germoplasma de vid de la Islas Baleares de la estación experimental Sa Granja en Palma de Mallorca, gestionado por el Institut de Recerca i Formació Agroalimentària i Pesquera de les Illes Balears (IRFAP).

El material fue previamente identificado combinando ampelografía, marcadores microsatélites y referencias históricas de las variedades [1].

La comprobación del estado sanitario de las cepas se llevó a cabo mediante el test ELISA (‘enzyme-linked immunosorbent assay’) [4] de la casa comercial BIOREBA, siguiendo las instrucciones del fabricante. Los virus analizados fueron: Dos virus de Enrollado de la vid, el uno y el tres (GLRaV-1 y GLRaV-3), Entrenudo corto infeccioso (GFLV), Jaspeado o Fleck (GFkV), y el Virus del mosaico del Arabis (ArMV).

Para poder realizar una detección precisa, se tuvo en cuenta la época del año y el estado fenológico de la planta. Para la detección de los virus: GFkV y el GFLV, el muestreo se llevó a cabo en primavera (abril-mayo) y para la detección de los virus GLRaV-1 y -3 así como el ArMV, el muestreo se hizo durante el mes de octubre.

Se recolectaron 5 hojas basales por sarmiento y por muestra, se etiquetaron y colocaron en bolsas de plástico. Luego se almacenaron en nevera (4 °C) hasta su análisis sin superar nunca una semana de almacenamiento. Para procesar la muestra, se cortaron en trozos pequeños la parte terminal del peciolo y la porción contigua del limbo de cada hoja, hasta obtener una muestra de 200 mg. Se utilizaron extractos crudos de tres plantas sanas como controles negativos. Las muestras se consideraron positivas cuando los valores de absorbancia eran al menos el doble de los de los controles negativos.

Los resultados del presente estudio, realizado en 33 cultivares de vid procedentes del Banco de Germoplasma de Vid de las Islas Baleares, revelaron una elevada presencia de virus con diferentes niveles de incidencia. Sin embargo, el análisis del Virus del mosaico del Arabis (ArMV) resultó negativo en todas las muestras analizadas (Figura 1). Esto es esperable, ya que la prevalencia del ArMV en España es muy baja [5] y nunca se ha detectado en las Islas Baleares. En general, se obtuvieron altas tasas de infección en todos los cultivares estudiados y sólo el 8,25% de las plantas analizadas no estaban infectadas (Figura 1).

El virus con mayor presencia fue el virus del enrollado tipo 3 (GLRaV-3), en infecciones simples o combinado con otros virus (82% de las plantas analizadas). Este virus es uno de los más extendidos en toda España [6], así como en varias zonas vitivinícolas mediterráneas y también en el resto del mundo [7]. Una posible explicación de la alta incidencia del GLRaV-3 con respecto a otros GLRaVs, podría ser su mayor eficiencia de multiplicación en el hospedador [8]. En nuestro estudio, es muy probable que la alta presencia de GLRaV-3 esté relacionada con la presencia de vectores del virus (cochinillas). Estos vectores se reproducen fácilmente en zonas cálidas suaves y con alta humedad, coincidiendo con las condiciones climáticas de Baleares. De hecho, hay claras evidencias de la presencia de Planococcus citri, un conocido vector de GLRaV-3 en los viñedos de las Islas Baleares.

El segundo virus más frecuente fue el del jaspeado (GFkV), seguido del entrenudo corto infeccioso (GFLV) con un 70 y 40% respectivamente. En la mayor parte de los casos estos virus se presentaron en combinación con el GLRaV-3 (GLRaV-3 + GFkV (71,4% en 17 cultivares) y GLRaV-3 + GFLV (25,2% en 9 cultivares). La gran incidencia de infecciones dobles merece atención, puesto que la infección vírica múltiple puede tener un efecto negativo más importante en la calidad de uva que la infección simple [10]. Finalmente, el GLRaV-1 fue el virus menos común, apareciendo sólo en cuatro variedades, con solo un 3,8% de incidencia total (Figura 1).

Si bien es cierto que la normativa europea de certificación exige la ausencia del GFkV sólo en portainjertos y no en Vitis vinifera L. (Directiva 2005/43/CE de la Comisión por la que se modifican los anexos de la Directiva 68/193/CEE del Consejo), sabemos por estudios previos de nuestro grupo que la presencia del GFkV puede afectar a los procesos fisiológicos [9]. Por ello, teniendo en cuenta este hecho y la elevada incidencia de este virus encontrada en este estudio, sería recomendable incluir este virus en los programas de selección de variedades.

La incidencia de GFLV fue inferior a la del resto de virus estudiados, exceptuando ArMV. En condiciones naturales, el GFLV se transmite en muchos casos por el nematodo parásito Xiphinema index. En este estudio, la incidencia relativamente baja de GFLV podría explicarse por la escasa presencia de nematodos en la colección de germoplasma debido a los tratamientos de control contra este vector. Además de la transmisión a través de vectores, la alta incidencia de todos los virus observados en los cultivares locales también podría explicarse por la multiplicación vegetativa de las cepas infectadas, ya que, al ser variedades minoritarias, en su mayoría pendientes de autorización, no existe material con garantía sanitaria en viveros especializados.

Del total de variedades analizadas, se encontraron cepas no infectadas en los cvs. Escursac, Fernandella, Gafarró, Giró ros, Gorgollassa, Jaumes, Malvasia de Banyalbufar, y Mancés de Tibus (Tabla 2). Algunos de éstos cultivares como Escursac, Giró ros, Gorgollassa, y Mancés de Tibus se pudieron autorizar gracias a la recuperación de estas cepas libres de virus. En otros cultivares como Argamussa, Batista, Vinater blanc o Vinater tinto, los resultados sirvieron para iniciar los programas de saneamiento por cultivo in vitro de meristemos que se llevan a cabo en la actualidad.

Tabla 2. Escala de colores de la incidencia de virus en 33 variedades locales de vid de las Islas Baleares (% de infecciones simples, dobles o múltiples). Datos extraídos de El Aou-ouad et al. (2022). Datos extraídos de El Aou-ouad et al. (2022).

En conclusión, nuestros resultados revelaron que las variedades minoritarias de Baleares presentaban un alto grado de infección y, en su mayor parte, con más de un virus. No obstante, los resultados sirvieron también para detectar las cepas libres de virus y proceder a la recuperación para su cultivo. Teniendo en cuenta el deficiente estado sanitario del material evaluado, así como la escasa posibilidad de encontrar cepas libres de virus en el campo, los resultados pusieron de manifiesto la necesidad de aplicar técnicas de saneamiento por biotecnología para la recuperación de las variedades de las que no se dispone de material libre de virus y han demostrado tener un alto interés agronómico y enológico.

Bibliografía

1. García Muñoz, S.; Lacombe, T.; De Andrés, M.T.; Gaforio, L.; Muñoz Organero, G.; Lacuou, V.; This, P.; Cabello, F. Grape varieties (Vitis vinifera L.) from the Balearic Islands. genetic characterization and relationship with Iberian Peninsula and Mediterranean Basin. Genet Resour Crop Ev. 2012, 59, 589-605.
2. Escalona, J.M.; Luna, J.M.; Bota, J.; Garau, C.; Martorell, A.Varietats de vinya de les Illes Balears. (España):Conselleria de Mediambient, Agricultura i Pesca, 2017. ISBN 978-84-617-6448-8
3. El Aou-ouad, H.; Montero, R.; Baraza, E.; Bota, J. Recovering Ancient Grapevine Cultivars in the Balearic Islands: Sanitary Status Evaluation and Virus Elimination. Plants. 2022, 11(13), 1754.
4. Clark, M.F.; Adams, A.N. Characteristics of the Microplate Method of Enzyme Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Plant Viruses. J Gen Virol. 1977, 34, 475-483.
5. Aballeira, A.; Mansilla, J.P.; Padilla, V.; Hita, I.; Cabaleiro, C.; Olmos, A.; Legorburu, F.J. First records of Arabis mosaic virus (ARMV) on grapevine in Spain. Ext Abs XVI Meeting of the ICVG. Dijon, France. 2010, p. 85
6. Cabaleiro, C.; Couceiro, C.; Pereira, S.; Cid, M.; Barrasa, M.; Segura, A. Spatial analysis of epidemics of Grapevine leafroll associated virus-3. Eur. J. Plant Pathol. 2008, 121, 121–130.
7. Maree, H.J.; Almeida, R.P.P.; Bester, R.; Chooi, K.M.; Cohen, D.; Dolja, V.V.; Fuchs, M.F.; Golino, D.A.; Jooste, A.E.C.; Martelli, G.P.; et al. Grapevine leafroll-associated virus 3. Front. Microbiol. 2013, 4, 82.
8. Velasco, L.; Bota, J.; Montero, R.; Cretazzo, E. Differences of three ampeloviruses multiplication in plant contribute to explain their incidences in vineyards. Plant Dis. 2014, 98, 395–400.
9. Bota, J.; Cretazzo, E.; Montero, R.; Rosselló, J.; Cifre, J. Grapevine fleck virus (GFkV) elimination in a selected clone of Manto Negro cv. and its effects on photosynthesis. J. Int.Sci. Vigne Vin. 2014, 48, 1.
10. Kovacs, L.G.; Hanami, H.; Fortenberry, M.; Kaps, M.L. Latent infection by leafroll agent GLRaV-3 is linked to lower fruit quality in French–American hybrid grapevines Vidal blanc and St. Vincent. Am. J. Enol. Vitic. 2011, 52, 254–259.