VN22-Eneo

ENOLOGÍA 38 una bodega privada del municipio de Jerez de la Frontera (Cádiz, España). Posteriormente se centrifugaron y liofilizaron durante 72 horas. Una vez liofilizadas se homogeneizaron y con- servaron en condiciones de sequedad y oscuridad hasta su utilización para la extracción. Proceso de extracción: Para llevar a cabo las extracciones de Antocianinas Totales (AT) y Compuestos Polifenólicos Totales (CPT) se empleó una sonda ultrasonidos acoplada a un regula- dor de ciclo y amplitud junto con un baño termostatizado para el control de la temperatura. Se estudiaron tres niveles distintos para cada paráme- tro a optimizar (bajo, medio y alto) y fueron los siguientes: porcentaje de metanol (0-25-50% para AT y 25-50- 75% para CPT), temperatura (10-35-60 °C), pH (2-4,5-7), ratio disolvente:lías (10:0,5-15:0,5:20:0,5), amplitud de la onda (30-45-70%) y ciclo de la onda (0,2-0,45-0,7 s). Para cada extracción se emplearon 0,5 gramos de lías y se extrajeron en las condiciones fijadas por la metodología durante 10 minu- tos. Posteriormente se centrifugaron a 5.900 g durante 5 minutos y el sobre- nadante se conservó a -20 °C. Metodología: La identificación de las 14 antocianinas diferentes encontra- das en los extractos se llevó a cabo mediante UHPLC-QToF-MS siguiendo la metodología propuesta por González de Peredo et al., (2019). Una vez identificadas se cuantificaron las AT mediante UHPLC-UV-Vis siguiendo las indicaciones de Pereira et al., (2019) (Figura 1). Por último, la cuantificación de CPT se llevó a cabo siguiendo el método propuesto por Singleton et al., (1999) y el procedimiento propuesto por Espada-Bellido et al., (2017). RESULTADOS Y DISCUSIÓN En la presente investigación, se empleó un DBB de seis factores y tres niveles para establecer las condiciones ópti- mas del proceso de EAU para obtener el mayor rendimiento posible AT y CPT. Todas las extracciones se optimizaron para seis variables diferentes: porcen- taje de metanol en el disolvente (X1), temperatura (X2), amplitud de onda ultrasónica (X3), ciclo de onda ultra- sónica (X4), pH del disolvente (X5) y relación disolvente:masa (X6). Todo el diseño consistió en 54 extracciones con seis repeticiones en el punto central realizadas en orden aleatorio. Las seis variables se estudiaron en tres niveles diferentes; -1 (bajo), 0 (medio) y +1 (alto). Los resultados de AT (R TA , mg/g lías) y C PT (R TP , mg/g lías) y todo el diseño experimental se muestran en el Anexo I. Para correlacionar las relaciones entre las variables, los resultados obtenidos después del análisis se introdujeron en la siguiente ecuación polinómica de segundo orden: R = β 0 + β 1 X 1 + β 2 X 2 + β 3 X 3 + β 4 X 4 + β 5 X 5 + β 6 X 6 + β 11 X 12 + β 12 X 1 X 2 + β 13 X 1 X 3 – β 14 X 1 X 4 + β 15 X 1 X 5 + β 16 X 1 X 6 + β 22 X 22 + β 23 X 2 X 3 + β 24 X 2 X 4 + β 25 X 2 X 5 + β 26 X 2 X 6 + β 33 X 32 + β 34 X 3 X 4 + β 35 X 3 X 5 + β 36 X 3 X 6 + β 44 X 42 + β 45 X 4 X 5 + β 46 X 4 X 6 + β 55 X 52 + β 56 X 5 X 6 + β 66 X 62 Donde R es la respuesta de las extrac- ciones, β 0 es la constante del modelo, β i son los coeficientes lineares, β ij son la interacción de los coeficientes, β ii son los coeficientes cuadráticos y, X i y X j son las variables independientes. Para optimizar las seis variables estudiadas, un análisis de la varianza (ANOVA, Anexo II, Anexo III) se llevó a cabo para evaluar el efecto de las distintas variables estudiadas y sus interacciones. El análisis del modelo mostró claramente que, para la extracción de AT, el porcentaje de Figura 1. Cromatograma de las antocianinas analizadas mediante UHPLC-UV-Vis en los extractos de lías. Asignación de los picos: (1) delfinidin 3-O-glucósido, (2): cyanidin 3-O-glucósido, (3): petunidin 3-O-glucósido, (4): peonidin 3-O-glucósido, (5): malvidin 3-O-glucósido, (6): delphinidin 3-O-(6’’-acetil)-glucósido, (7): cianidin 3-O-(6’’-acetil)-glucósido, (8): petunidin 3-O-(6’’-acetil)-glucósido, (9): peonidin 3-O-(6’’- acetil)-glucósido, (10): malvidin 3-O-(6’’-acetil)-glucósido, (11): cianidin 3-O-(6’’-coumaroyl)-glucósido, (12): petunidin 3-O-(6’’-p-coumaroyl)- glucósido, (13): malvidin 3-O-(6’’-p-coumaroyl)-glucósido, (14): peonidin 3-O-(6’’-p-coumaryl)-glucósido.