REPRODUCCIÓN Se tomaron muestras de sangre en la vena caudal de manera repetida a lo largo del estudio cuando los animales tenían edades comprendidas entre los 1.5 y los 4 años. Estos animales se habían producido mediante IA (IA; 7 animales, 5 machos y 2 hembras, 14 muestras) o mediante PIV, seguida de vitrificación y TE (TEV). En un grupo se realizó un cultivo embrionario clásico (TEV-C; 7 animales, 4 machos y 3 hembras, 18 muestras) y en otro grupo se suplementó el medio de cultivo embrionario con fluido oviductal y uterino, con el objetivo de aportar sustancias que están en estos fluidos de manera fisiológica (TEV-F; 4 animales, 3 machos y 1 hembras, 12 muestras). La descripción completa de la generación de estos animales y su evolución en las primeras fases puede consultarse en (Lopes et al. 2020; Lopes et al. 2022). Toma de las muestras sanguíneas y análisis de parámetros bioquímicos Se tomaron muestras de sangre en la vena caudal, utilizando tubos de vacío con heparina de litio como anticoagulante. El plasma sanguíneo se obtuvo por centrifugación de la sangre a 1000G durante 10 minutos, y luego se almacenó a -80°C hasta el análisis. En estas muestras se evaluaron los parámetros de bioquímica en plasma mediante el uso de un analizador automático (Olympus AU400, Japón) en el laboratorio Interlab-UMU de la Universidad de Murcia. La precisión inter e intraensayo de los métodos fue lineal e inferior al 15%. Los parámetros incluidos fueron: proteínas totales (g/dL), albúmina (g/dL), globulina (g/dL), creatinina (mg/dL), urea (mg/dL), colesterol (mg/dL), triglicéridos (mg/dL), amilasa (UI/L), lipasa (UI/L), creatinina cinasa (CK, UI/L), fosfatasa alcalina (ALP; UI/L), gamma-glutamil transpeptidasa (GGT; UI/L), aspartato aminotransferasa (AST; UI/L), alanina aminotransferasa (ALT, UI/L) y bilirrubina total (mg/dL). Análisis estadístico Los datos se analizaron mediante una prueba ANOVA de medidas repetidas con diseño anidado (animal dentro de grupo) y grupo como factor principal, tras comprobar que no había efecto del sexo del animal en los resultados. Se utilizó el programa SPSS (versión 28, IBM). Los modelos anidados permiten diferenciar la variabilidad entre los animales dentro del grupo, del verdadero efecto del grupo, en este caso, de la técnica de reproducción asistida utilizada para generar al animal. RESULTADOS Los valores de todos los parámetros estudiados y de todos los animales estaban dentro de los niveles de normalidad (Doornenbal et al. 1988; Kessell 2015), lo que indica que no hay evidencias de que los animales derivados de técnicas de producción in vitro, vitrificación y transferencia presenten anomalías en sus parámetros de bioquímica que indiquen alguna alteración en su salud. Al analizar si había diferencias entre los valores de los diversos grupos en sus parámetros de bioquímica sanguínea, Figura 1 Figura 2 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 Amilasa (UI/L) AST (UI/L) IA TEV-C TEV-F 0 2 4 6 8 10 12 14 16 Creatinina (mg/dL) Trigliceridos (mg/dL) IA TEV-C TEV-F Figura 1. Valores de las enzimas amilasa y AST, en UI/L, en muestras de plasma sanguíneo de animales obtenidos por inseminación artificial (IA), producción embrionaria clásica (TEV-C) o producción embrionaria con suplementación de fluidos reproductivos (TEV-F). a, b, c diferentes letras indican diferencias significativas entre grupos (P < 0,05). Figura 1 Figura 2 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 Amilasa (UI/L) AST (UI/L) IA TEV-C TEV-F 0 2 4 6 8 10 12 14 16 Creatinina (mg/dL) Trigliceridos (mg/dL) IA TEV-C TEV-F Figura 2. Valores creatinina y triglicéridos, en mg/dL en muestras de plasma sanguíneo de animales obtenidos por inseminación artificial (IA), producción embrionaria clásica (TEV-C) y producción embrionaria con suplementación de fluidos reproductivos (TEV-F). a, b, c diferentes letras indican diferencias significativas entre grupos (P < 0.05). 52
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