SANIDAD Figura 1. Representación esquemática de la evolución de la respuesta inmune frente a tuberculosis en el tiempo. En una etapa inicial los animales infectados reaccionarían a las técnicas de base celular, IDTB e IFN-γ. En una fase posterior, se produce un descenso de la reactividad de estas técnicas en paralelo a un incremento de la reactividad de las técnicas basadas en la detección de anticuerpos dando lugar al estado denominadocomoanergiaa lapar que incrementa la severidad de las lesiones. Imagen adaptada del estudio Pollock y Neill, 2002. Fuente: Visavet. 64 ticas y salvajes (Infantes-Lorenzo et al ., 2019; Thomas et al ., 2019). La principal ventaja de usar este complejo proteico en el diagnóstico humoral es su elevada especificidad, pudiendo reducir así las reacciones frente a algunas micobacterias no tuberculosas o micobacterias ambientales que pudieran interferir en el diagnóstico de la TB (Infantes-Lorenzo et al ., 2017). Como técnica, el diagnóstico humoral presentaría numerosas ventajas económicas y logísticas en el caso de poder utilizarse como alternativa a las pruebas oficiales en el futuro. A diferencia de la IDTB, el empleo de estas técnicas reduce las complicaciones asociadas al manejo de los animales al requerir ser manipulados tan solo en una ocasión, con la consiguiente disminución del estrés y mejora del bienestar animal. Por otro lado, al no necesitar de una estimulación antigénica como sí ocurre en la IDTB con la aplicación de las PPDs, la técnica podría repetirse sin necesidad de establecer plazos por la posible alteración de los resultados (Coad et al., 2010). También es destacable que, en explotaciones de difícil acceso o sin laboratorios cercanos, la detección de anticuerpos puede presentar ventajas con respecto a la prueba de IFN-γ ya que, a diferencia de ésta, las muestras no requieren de una estimulación antigénica previa a la técnica tras su recogida (Bezos et al ., 2014). Finalmente, otra ventaja destacable que presentan estas técnicas es que algunos formatos como el ELISA admiten generalmente diferentes tipos demuestras como suero o plasma (Casal et al ., 2017), leche (Buddle et al ., 2013; Zhu et al ., 2022) o incluso orina y saliva (Lyashchenko et al ., 2021), permitiendo un análisis rápido y en un gran número de muestras de forma simultánea. En definitiva, los prometedores resultados de los trabajos de investigación y las ventajas expuestas anteriormente podrían anticipar la implementación de estas técnicas como método diagnóstico efectivo de la TB en determinadas situaciones epidemiológicas en un futuro próximo. • Plataformas experimentales para la detección de citoquinas Las citoquinas son proteínas de bajo peso molecular implicadas en la regulación de la respuesta inmunitaria (Etna et al ., 2014). Es necesario remarcar que las citoquinas pueden entenderse como señalizadores del estado inmunitario de un animal, del estado de infección o latencia de este, o de su respuesta frente a la vacunación, entre otros, de ahí el interés práctico por su estudio, detección y cuantificación. Aunque la detección de citoquinas específicas ya se emplea en la actualidad para el diagnóstico oficial en la prueba de IFN-γ (MAPA, 2023), las nuevas líneas de investigación se orientan hacia metodologías que mejoren a las técnicas actuales o que amplíen el abanico de citoquinas detectables para lograr un mejor rendimiento en términos de sensibilidad y especificidad (Smith et al ., 2021; Steinbach et al ., 2019). Una de las técnicas experimentales empleadas en la detección de IFN-γ es el ELISpot, un ensayo de base inmunitaria que puede aplicarse para la detección de diferentes citoquinas en sangre previamente estimulada con antígenos específicos, de forma similar a la prueba de IFN-γ. La principal ventaja de este sistema es su gran sensibilidad, razón por la que se ha empleado de forma experimental para el diagnóstico de la TB, permitiendo incluso clasificar correctamente a los animales tuberculosos de forma más temprana que la prueba de IFN-γ, (Li et al ., 2022). Además del IFN-γ, existen otras citoquinas interesantes hacia las que se dirigen algunos estudios de investigación de la TB bovina en la actualidad, como la IL-2. Esta es una citoquina pro-inflamatoria secretada por los linfocitos en la respuesta inmune frente a las micobacterias (Whelan et al ., 2011) y cuyo interés en la detección radica en que es considerada un importante biomarcador de infección, pero también de presencia de lesiones compatibles con TB, de una forma más específica incluso que el IFN-γ (Steinbach et al ., 2019). Ciertos estudios de investigación han tratado de implementar la detección de la IL-2 mediante diferentes técnicas en el laboratorio, incluyendo la citometría de flujo (Xia et al ., 2020). En este estudio se pudo demostrar la relevancia de la
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